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建庫試劑
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主要推薦單細胞測序,尤其是關注細胞的基因表達、蛋白表達、抗原表位研究的單細胞 RNA 測序。
組織樣本建議切成不超過0.3cm x 0.3cm的小塊,根據不同組織可適當調整,最大不超過0.5cm x 0.5cm的大小。
目前不建議儲存單細胞,從原理上組織保存液對細胞具有一定的保存能力,但目前缺乏充足的實驗數據證實對不同細胞的保存效果,建議使用專門的細胞保存液。
如果超過72h,推薦直接使用液氮速凍整個組織。不過這種處理方法,復蘇時容易造成細胞破損,可能已經無法滿足單細胞 RNA 測序的需求,更適用單細胞核測序。請根據實際項目需求,來選擇應用方案。
單細胞測序,尤其是需要研究基因表達、蛋白表達、抗原表位的單細胞 RNA 測序,需要實驗的時候保留完整的細胞形態和活性。新鮮的組織一旦離體,如果無法立即對組織進行單細胞后續實驗,組織的細胞狀態短時間內就會發生變化甚至發生死亡,并在裂解后向周圍環境釋放,造成檢測中的背景噪音,從而影響單細胞數據質量。
因此,新鮮組織離體的時候,如果不能馬上進行后續實驗,需要馬上使用 MGIEasy 組織保存液進行保存和運輸。
操作步驟如下:
1. 在生物安全柜中,準備一個合適大小的一次性無菌培養皿,置于冰上,加入少量預冷至2 ℃~8 ℃的細胞培養基,如 DMEM。
2. 采集新鮮的組織樣本,并迅速置于冰上的培養皿中。
3. 用鑷子輕柔晃動組織,用培養基簡單地清洗組織。
4. 準備一個新的一次性無菌培養皿并加入培養基,將培養皿置于冰上。用鑷子將清洗完的組織轉移至該培養皿。
5. 用手術刀片快速將組織切成不超過0.3cm x 0.3 cm的小塊,用培養皿中的培養基清洗切好的組織,去掉血液,肌肉組織等雜質,再轉移到組織保存液中進行保存。
提示:保存液與保存的組織的體積比應大于10:1。建議10mL保存液保存不超過4~5塊0.3cm x 0.3cm的組織塊,約100mg。保存液過少可能會導致局部組織細胞缺乏保護。
6. 將保存液保存的組織放置于2 ℃~8 ℃保存或運輸,保存或運輸的總時間不超過72小時。
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